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本蛋白提取液采用优质原料配制，对动物细胞胞膜、胞浆、胞核成分均有较强裂解作用，是经典常用的细胞组织快速蛋白提取液。本蛋白提取液提取得到的蛋白样品可以用于常规的Western Blot、IP等下游实验。

• 使用方便，从细胞，组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。
  
• 提取过程简单方便，将蛋白提取的时间缩短至30分钟～1小时。
  
• 含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
  
• 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
  
• 总蛋白提取液含多种有效成分，可以充分释放胞浆蛋白、核蛋白和膜蛋白，又可结合释出的蛋白防止沉淀。
  
• 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

• 细胞蛋白提取
  
  • 蛋白提取液制备：
    每1mL冷的蛋白提取液中加入2μL蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
    
  • 取5～10×10⁶个细胞，在4℃，1000g条件下离心5～10分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
    
  • 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
    
  • 每5×10⁶个细胞中加入500μL冷的蛋白提取液，混匀后，在4℃条件下振荡15～20分钟。
    
    • 每10⁶个细胞，大约10mg或10μL压积，加100μL蛋白提取液。大约相当于6孔板的每孔加入100μL～150μL，或一个75cm2培养瓶加1mL。提取液和细胞应充分接触。如果蛋白提取液不足量，细胞裂解效率将会降低。
  • 在4℃，12000～14000g条件下离心15分钟。
    
  • 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，用于下游实验。
• 组织蛋白提取
  
  • 蛋白提取液制备：
    每1mL冷的蛋白提取液加入2μL蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
    
  • 取100mg组织样本剪碎，加入1mL蛋白提取液，用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体。
    
  • 将组织匀浆在4℃振荡15～25分钟。
    
  • 在4℃，12000g条件下离心10分钟。
    
  • 将上清吸入另一预冷的干净离心管，用于下游实验。
    上述蛋白提取物可分装后于-80℃冰箱保存备用。
    
    • 建议用BCA法进行蛋白定量。相关产品：HR0329。
      
    • 蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。